植物脫氫酶(GDH)ELISA試劑盒

ELISA法是免疫診斷中的一項(xiàng)新技術(shù)，現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲(chóng)病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測(cè)定，根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果，認(rèn)為ELISA法具有靈敏、特異、簡(jiǎn)單、快速、穩(wěn)定及易于自動(dòng)化操作等特點(diǎn)。不僅適用于臨床標(biāo)本的檢查，而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標(biāo)本,因此，也適合于血清流行病學(xué)調(diào)查。本法不僅可以用來(lái)測(cè)定抗ti，而且也可用于測(cè)定體液中的循環(huán)抗原，所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域的應(yīng)用范圍日益擴(kuò)大，

免責(zé)聲明

1. 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé)。

2. 嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作，實(shí)驗(yàn)者違反說(shuō)明書(shū)操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。

3. 產(chǎn)品特點(diǎn)

一、高效、靈敏、特異的抗ti；

二、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性；

三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體；

四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類(lèi)型；

五、節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)。

elisa試劑盒回收率是反應(yīng)待測(cè)物在樣品分析過(guò)程中的損失的程度，損失越少，回收率越高，如果作標(biāo)液1PPM，就是1毫克/升，而作出標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)為0.99毫克/升，就是說(shuō)你的回收率是99%，這個(gè)與真實(shí)成分有密切的關(guān)系，說(shuō)明方法的準(zhǔn)確度。比如水中總無(wú)機(jī)氯含量測(cè)定，樣品水中含有無(wú)機(jī)氯20mg/L，取100mL被測(cè)水樣品，加入0.1mL濃度為10mg/mL的含無(wú)機(jī)氯標(biāo)準(zhǔn)樣品，測(cè)定時(shí)忽略體積變化，如果測(cè)定出樣品中無(wú)機(jī)氯為29.8mg/L，則認(rèn)為回收率為99%。

植物脫氫酶(GDH)ELISA試劑盒

實(shí)驗(yàn)過(guò)程:

1.試劑準(zhǔn)備:所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫,使用后請(qǐng)立即按照說(shuō)明書(shū)要求保存試劑。實(shí)驗(yàn)操作中請(qǐng) 使用一次性的吸頭,避免交叉污染。

2.加樣:加樣或加試劑時(shí)，請(qǐng)注意在吸取標(biāo)本/標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時(shí)，第yi個(gè)孔與最hou-一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大，將會(huì)導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育“時(shí)間,從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時(shí)間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品) 將控制在10分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用多道移液器加樣。

3.孵育:為防止樣品蒸發(fā),試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā);洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作,任何時(shí)侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài):同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度。

4.洗滌:洗滌過(guò)程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響最hou的酶標(biāo)儀讀數(shù)。

常見(jiàn)問(wèn)題解析：

1、試劑的選擇：選擇優(yōu)良試劑大家都是知道的，但是在檢測(cè)之前還應(yīng)該提前半個(gè)小時(shí)將試劑拿到常溫下進(jìn)行解凍。

2、加樣中可能遇到的問(wèn)題。

3、洗板時(shí)容易造成誤差。

4、顯色問(wèn)題：使用了過(guò)期的顯色劑或者是顯色劑用過(guò)后放置時(shí)間太長(zhǎng)，都有可能造成顯色劑不顯色。

5、終止反應(yīng)：在加終止劑的時(shí)候由于傾倒速度快，產(chǎn)生氣泡，造成假陽(yáng)性結(jié)果，所以在倒終止劑的時(shí)候要緩慢倒。

6、讀板：讀板的時(shí)候首先應(yīng)該保證板的清潔干凈。

常用方法及原理如下：

1. 夾心法：

夾心法常用于檢測(cè)大分子抗原，一般的操作步驟為:

a. 將具有專(zhuān)一性的抗ti固著（coating）于塑膠孔盤(pán)上，完成后洗去多余抗ti

b. 加入待測(cè)檢體，檢體中若含有待測(cè)的抗原，則其會(huì)與塑膠孔盤(pán)上的抗ti進(jìn)行專(zhuān)一性鍵結(jié)

c. 洗去多余待測(cè)檢體，加入另一種對(duì)抗原專(zhuān)一的一次抗ti，與待測(cè)抗原進(jìn)行鍵結(jié)

d. 洗去多余未鍵結(jié)一次抗ti，加入帶有酶的二次抗ti，與一次抗ti鍵結(jié)

e. 洗去多余未鍵結(jié)二次抗ti，加入酶底物使酵素呈色，以肉眼或儀器讀取呈色結(jié)果

原理：針對(duì)抗原分子上2個(gè)不同抗原決定簇的單克隆抗ti分別作為固相抗ti和酶標(biāo)抗ti，將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標(biāo)抗原結(jié)合物。

2. 間接法

間接法常用于檢測(cè)抗ti，一般的操作步驟為：

a. 將已知的抗原固著于塑膠孔盤(pán)上，完成后洗去多余的抗原。

b. 加入待測(cè)檢體，檢體中若含有待測(cè)的一次抗ti，則其會(huì)與塑膠孔盤(pán)上的抗原進(jìn)行專(zhuān)一性鍵結(jié)。

c. 洗去多余待測(cè)檢體，加入帶有酶的二次抗ti，與待測(cè)的一次抗ti鍵結(jié)。

d. 洗去多余未鍵結(jié)二次抗ti，加入酶底物使酶呈色，藉儀器（ELISA reader）測(cè)定塑膠盤(pán)中的吸光值（OD值），以評(píng)估有色終產(chǎn)物的含量即可測(cè)量待測(cè)抗ti的含量。

原理：利用酶標(biāo)記的抗抗ti以檢測(cè)已與固相結(jié)合的受檢抗ti。

3. 競(jìng)爭(zhēng)法

競(jìng)爭(zhēng)法是一種較少用到的ELISA檢測(cè)機(jī)制，一般用于檢測(cè)小分子抗原，其操作步驟為：

a. 將具有專(zhuān)一性的抗ti固著于塑膠孔盤(pán)上，完成后洗去多余抗ti

b. 加入待測(cè)檢體，使檢體中的待測(cè)抗原與塑膠孔盤(pán)上的抗ti進(jìn)行專(zhuān)一性鍵結(jié)

c. 加入帶有酶的抗原，此抗原也可與塑膠孔盤(pán)上的抗ti進(jìn)行專(zhuān)一性鍵結(jié)，由于塑膠孔盤(pán)上固著的抗ti數(shù)量有限，因此當(dāng)檢體中抗原的量越多，則帶有酶的抗原可鍵結(jié)的固著抗ti就越少，亦即，兩種抗原皆競(jìng)相與塑膠孔盤(pán)上抗ti鍵結(jié)，即所謂競(jìng)爭(zhēng)法之由來(lái)。

d. 洗去檢體與帶有酶的抗原，加入酶底物使酶呈色，當(dāng)檢體中抗原量越多，代表塑膠孔盤(pán)內(nèi)留下之帶有酶的抗原越少，顯色也就越淺。

e. 當(dāng)需要偵測(cè)無(wú)法獲得兩種以上單一性抗ti的抗原，或是不易得到足夠的純化抗ti以固著于孔盤(pán)上時(shí)，一般會(huì)考慮使用競(jìng)爭(zhēng)法ELISA。

試劑和樣本的控制方法:

一、試劑

1.試劑的選擇:國(guó)家明確要求要采用批批檢定的形式對(duì)ELISA試劑嚴(yán)格把關(guān),我司嚴(yán)格按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行生產(chǎn),已獲得國(guó)家承認(rèn)的“三證",每一個(gè)產(chǎn)品都有對(duì)應(yīng)的生產(chǎn)批號(hào),只要客戶提前下單,我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品,不必?fù)?dān)心會(huì)有過(guò)期的試劑。我司的試劑,值得您選擇。

2.試劑的準(zhǔn)備:先將試劑盒先從冰箱中拿出來(lái),在室溫下放置20-30 min后,再進(jìn)行測(cè)定,使試劑盒在使用前與室溫平衡,這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所需的溫度,以滿足后面的測(cè)定需求。

二、樣本

1.內(nèi)源性干擾因素:包括類(lèi)因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等;

類(lèi)因子的控制方法:

①用F(ab)2替代完整的IgG;

②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理;

③檢測(cè)抗原時(shí),可用2-巰ji乙醇加入到標(biāo)本稀釋液中使RF降解;

補(bǔ)體的控制方法:

①用EDTA稀釋標(biāo)本;

②56℃ 30 min加熱血清使C1q滅活;

2.外源性干擾因素:包括標(biāo)本溶血、細(xì)菌污染、保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或凝固不全等;

控制方法:采血時(shí)規(guī)范操作,采集的血液勿用力震蕩,以防溶血;收集標(biāo)本時(shí)采用無(wú)菌試管,經(jīng)檢測(cè)后再低溫凍存;保存時(shí)間不宜過(guò)久,檢測(cè)時(shí)盡量采用新鮮標(biāo)本;對(duì)于凝固不全的血標(biāo)本可適當(dāng)加入抗凝劑,并放入37℃水中1 h,待充分凝固后再離心分離血清。

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