人巨噬細胞炎性蛋白2(MIP-2)ELISA試劑盒

ELISA檢測概述：

ELISA（酶聯接免疫吸附反應分析）是以免疫學反應為基礎，將抗原、抗ti的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結合起來的一種敏感性很高的實驗技術。 由于抗原、抗ti的反應在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應物，從而保證試驗結果的特異性與穩定性。

實際應用中，通過不同的設計，具體的方法步驟可有多種。即：用于檢測抗ti的間接法、用于檢測抗原的雙抗ti夾心法以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。目前我們對客戶提供比較常用的ELISA雙抗ti夾心法及ELISA間接法服務

特點概述

1.專一性強。抗原與抗ti的免疫反應是專一反應， 而免疫酶技術以免疫反應為基礎,所檢測的對象是抗原(或抗ti)，使用的抗ti除標記了酶以外，與普通抗ti的免疫反應特性并無多大差別。

2.靈敏度高。由于抗ti聯結上了酶，因此，借助于酶與底物的顯色反應，顯示抗原與抗ti的結合，大大提高了檢測的靈敏性,使檢測水平接近放射免疫測定法。

3.樣品易保存。經過酶反應顯示的有色產物大多比較穩定，因此有利于樣品的保存。

4.結果易觀察。對檢測結果即可用肉眼觀察,又可用顯微鏡觀察,也可以用分光光度計進行比色測定,還可用顯微鏡觀察。這是因為某些酶反應產物能使電子密度發生改變，從而引起被檢測物的顯示。

5.可以定量測定。溶液中的抗原物質，應用酶免吸附技術進行比色測定,依據光密度值的變化，可以定量。預計用細胞分光光度計可對組織內的抗原進行免疫酶技術的定量測定。

6.可以大規模測定樣品。如有成千.上萬份樣品需要進行檢測，免疫酶技術都能在較短時間內完成。

7.儀器和試劑簡單。對免疫沒技術來說，不需要熒光顯微鏡,也不需要測定放射性的特殊儀器,所用儀器及試劑均屬一般性儀器與試劑，普通實驗室及生產應用單位均易購置

ELISA試劑盒樣品收集、處理及保存方法：

1）血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2）血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3）細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4）組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液

5）保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。

試劑盒的儲存及有效期：

未開封的試劑盒：所有試劑均按試劑瓶標簽上所示保存。請注意，收到試劑盒后請盡快將TMB 洗滌液，終止液保存于4℃，其他試劑保存于-20℃。

使用后的試劑盒：剩余試劑仍需按照試劑瓶標簽所示的溫度保存，開封后的酶標板要加干燥劑后密封保存于-20℃，避免潮濕。

穩定性：

經測定，試劑盒在有效期內按推薦溫度保存，其活性降低率小于5%。

人巨噬細胞炎性蛋白2(MIP-2)ELISA試劑盒

試驗原理

試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將生wu素標記的抗ti同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關系。

試劑和樣本的控制方法:

一、試劑

1.試劑的選擇:國家明確要求要采用批批檢定的形式對ELISA試劑嚴格把關,我司嚴格按照國家標準進行生產,已獲得國家承認的“三證",每一個產品都有對應的生產批號,只要客戶提前下單,我們就能為您提供新批次的產品,不必擔心會有過期的試劑。我司的試劑,值得您選擇。

2.試劑的準備:先將試劑盒先從冰箱中拿出來,在室溫下放置20-30 min后,再進行測定,使試劑盒在使用前與室溫平衡,這樣做的目的能使反應微孔內的溫度較快地達到所需的溫度,以滿足后面的測定需求。

二、樣本

1.內源性干擾因素:包括類因子、補體、高濃度的非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等;

類因子的控制方法:

①用F(ab)2替代完整的IgG;

②標本用聯有熱變性IgG的固相吸附劑處理;

③檢測抗原時,可用2-巰ji乙醇加入到標本稀釋液中使RF降解;

補體的控制方法:

①用EDTA稀釋標本;

②56℃ 30 min加熱血清使C1q滅活;

2.外源性干擾因素:包括標本溶血、細菌污染、保存時間過長或凝固不全等;

控制方法:采血時規范操作,采集的血液勿用力震蕩,以防溶血;收集標本時采用無菌試管,經檢測后再低溫凍存;保存時間不宜過久,檢測時盡量采用新鮮標本;對于凝固不全的血標本可適當加入抗凝劑,并放入37℃水中1 h,待充分凝固后再離心分離血清。

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